DOSSIER
PLAN DE MUESTREO PARA ANÁLISIS DE LEGIONELLA:
INTRODUCCION
La nueva normativa española para la prevención y control de la
legionelosis, obliga no solo al tratamiento de limpieza y desinfección
de las instalaciones con riesgo de albergar Legionella, sino también
a la realización de análisis de control de la calidad microbiológica
y físico-química del agua, con el fin de que no presenten riego
para la salud pública. La capacidad de la Legionella de crecer
intracelularmente en el interior de otros organismos presentes
en el agua, como varias especies de amebas, siendo este uno de
los mecanismos que la protegen frente a agentes nocivos externos,
tales como tratamientos con cloro o biocidas, junto a sus requerimientos
nutritivos, hace que esta sea una bacteria que normalmente se
presenta asociada a materias orgánicas y lodos. Así, la Legionella
es una bacteria que si bien es difícil de erradicar en las instalaciones
donde se acantona y desarrolla distintas formas de resistencia
a los tratamientos preventivos, por otro lado también es un género
difícil de cultivar en el laboratorio, ya que aquí se presenta
como un germen exigente y de lento crecimiento. Esto hace necesario
controlar una serie de factores en la toma de muestras para asegurar
la validez en los resultados de los ensayos:
1.
Presencia de biofilm, lodos, u otros depósitos, donde la
bacteria pueda encontrarse en mayor concentración.
2. La presencia de desinfectantes como el cloro u otros biocidas
en el agua puede afectar a la viabilidad de las bacterias, que
podrían estar anidadas en los restos sólidos acumulados
en la instalación y que son puestos en contacto con el
agente químico durante la toma de muestra, por ello es
importante conocer su presencia, para poder neutralizarlo adecuadamente
en el mismo contenedor de recogida.
3. La temperatura del agua ( si fuera >55ºC) es otro factor
que podría llegar a afectar a la viabilidad de Legionella
por lo que también se debe controlar en el momento de tomar
la muestra.
Preparación
Del Material De Toma De Muestra
Material
Para
la toma de muestra, según tamaño y accesibilidad de la muestra
a recoger, se podrán utilizar distintos tipos de contenedor:
·
Bolsas estériles de cierre hermético de 150 cc. Alrededor.
·
Botellas asépticas de un solo uso de PP 1000 – 2000 cc.
·
Botes de PP o vidrio de 25 cc con boca ancha ( para lodos y limos
o muestras muy pequeñas).
·
Cuando sea necesario se utilizarán pipetas Pasteur asépticas,
de un solo uso ( Por ejemplo para bandejas poco accesibles de
los aparatos de refrigeración, depósitos pequeños como humectadores…).
La forma no neumónica conocida como “Fiebre de Pontiac”
(Fraser y cols 1979) que se manifiesta como un síndrome
febril agudo y autolimitado. Definición clínica
de caso (Memorándum OMS 1990):
·
Para mejor llenado de las botellas podrá utilizarse un embudo
de PP aséptico.
Muestra
en presencia de biocida
Si
el agua contiene o se cree que pueda contener un biocida oxidante,
deberá añadirse un exceso de un agente inactivante
al contenedor antes o a la vez que la muestra.
El
cloro y otros agentes oxidantes se inactivan por la adición
de tiosulfato potásico o tiosulfato sódico al contenedor.
Para otros biocidas todavía no es aplicable la adición
de un neutralizante universal.
·
Cuando se sospeche o conozca que el agua a recoger ha sido
clorada, el cloro se neutralizará añadiendo a estos
recipientes 0,1 ml de tiosulfato sódico al 10%, por cada
100 ml de agua recogida
PLAN
DE MUESTREO
Pueden
establecerse distintos planes de muestreo según el tamaño
y tipo de instalación a controlar.
1.
En sistemas con varias salidas de agua susceptibles de aerosolizar,
como duchas y grifos de agua sanitaria, riego por aspersión,
sistemas anti-incendios, etc.. El técnico destinado a la
toma de muestra establecerá un nº mínimo significativo
(no inferior a dos puntos por planta) de puntos de salida por
sección o planta de la instalación, seleccionando
puntos cercanos y alejados de los depósitos. Estos puntos
serán rotatorios, no al azar, ya que si la instalación
consta de muchos puntos, y debido al coste que supondría
aumentar el nº de puntos, se seleccionarán aquellos
que tras la inspección visual del técnico resulten
mas sospechosos de albergar Legionella, por presentar restos de
suciedad, cal o biofilm.
2.
En los depósitos grandes (superior a 50 litros): Torres
de refrigeración, aljibes, acumuladores… Se recogerá
al menos un litro de agua, tomando muestra de los lodos o residuos
sólidos que pudiera haber adheridos a las paredes.
3.
En depósitos pequeños (inferior a 50 litros) y/o
de difícil acceso, como equipos de terapia personal, humidificadores,
bandejas de condensadores evaporativos… se tomará
la mayor cantidad de muestra posible, observando también
la presencia de restos sólidos, suciedad o biofilm, rascando
y arrastrando la mayor parte de estos, si existieran, ya que es
aquí donde mayor probabilidad hay de encontrar la Legionella.
PROCEDIMIENTOS DE MUESTREO
Según
el tipo de instalación a muestrear se utilizarán
distintos procedimientos.
Agua
de la red:
Elegir
habitaciones que no hayan sido utilizadas los días previos
a la toma de muestra. Tomar preferentemente agua caliente, procediendo
de la forma siguiente:
1.
Abrir el grifo o ducha suavemente para recoger los primeros
100 ml (aprox.)
2.
Rascar con una torunda de algodón el interior del grifo
o ducha e introducir la torunda en el agua.
3.
Recoger otra pequeña cantidad de agua ( hasta un máximo
de 1 litro) para que arrastre los residuos del rascado.
4.
Medir la temperatura en ese punto y anotarla.
5.
Medir la concentración de cloro libre y anotar.
Torre
de refrigeración:
Tomar
la muestra de la parte baja de la torre, junto con los restos
de lodo o materia orgánica. Rascar posibles incrustaciones
de la pared. Tomar 1 litro de muestra. Medir temperatura del
agua y cantidad de cloro libre y anotar.
Depósito
de Agua (Caliente o fría):
Tomar
la muestra de la parte baja del depósito y si hay materiales
sedimentados, recoger parte de estos. Si existen incrustaciones
en la pared, rascar parte de ellas sobre la muestra. Recoger
1 litro, medir Tª y cantidad de cloro libre y anotar.
Equipos de terapia personal u otros sistemas generadores de
aerosoles
Tomar
las muestras de acuerdo con el tamaño y cantidad de agua
del sistema. En aquellos casos en que existan depósitos
de corrosión o sedimentos, rascar parte de ellos y diluirlos
en la fracción líquida de la muestra.
TRANSPORTE
DE MUESTRAS AL LABORATORIO
Como
norma los análisis microbiológicos deben comenzar
tan pronto como sea posible tras la recepción de la muestra
de agua en el laboratorio, preferiblemente en el día
de muestreo, particularmente en las muestras que se sabe que
contienen biocidas. Pero en cualquier caso se reconoce que el
transporte de muestras al laboratorio de análisis puede
llevar algún tiempo, particularmente desde lugares alejados.
En estos casos se recomienda que el intervalo de tiempo entre
la recolección de la muestra y su concentración
sea de 2 días, y no debe exceder de 5 días.
Las
muestras deben transportarse a menos de 18ºC pero a mas
de 10ºC, y deben ser protegidas del calor y la luz del
sol. Entregar la muestra en el laboratorio lo antes posible,
preferiblemente en el día, pero no más de dos
días.
Detalles
del origen y volumen de la muestra, tanto como la presencia
y naturaleza de cualquier biocida, deben ser anotados y entregados
en el laboratorio con las muestras, como datos de apoyo para
el análisis.
Tanto
por seguridad como por razones analíticas, no es aconsejable
el análisis de muestras de origen desconocido o de aguas
refrigeradas o tratadas a menos que estas vayan acompañadas
de la información adecuada, por lo que es importante
rellenar una ficha de solicitud del análisis con los
datos de la toma de muestra, done se reflejen el máximo
nº de datos de la muestra, como: procedencia, tipo (agua,
lodos…), volumen ( en cc), presencia de biocidas, temperatura
en el punto de recogida
Marta Martín-Roldán
Microbióloga.
BIOMARO, microbiología ambiental
